本研究采用經(jīng)典的遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)方法：小鼠骨髓微核率試驗(yàn)、小鼠精子畸形分析試驗(yàn)，鼠傷寒沙門氏桿菌回復(fù)突變試驗(yàn)、倉鼠肺成纖維細(xì)胞(CHL)染色體畸變試驗(yàn)， 以曬青毛茶為對照，對不同貯藏年份的共5種代表性普洱茶產(chǎn)品進(jìn)行了遺傳毒性安全性毒理學(xué)評價(jià)，以檢測其是否具有潛在的致突變和致癌毒性。?

材料與方法

1.1 茶葉原料?

為了研究普洱茶代表性產(chǎn)品的安全性，本研究選取了不同廠家，不同貯藏年份和不同包裝形式的五個(gè)普洱茶樣品作為研究對象，分別編號為：A、B、C、E、F，并選取了大葉種烘青綠茶作為對照。（如表）?

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1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

體重為18－22克昆明種(KM)小白鼠。?

1.3 實(shí)驗(yàn)菌株

鼠沙門氏傷寒桿菌突變株 TA97、TA98、 TA100 、TA102。?

1.4 試驗(yàn)細(xì)胞株

中國倉鼠肺纖維細(xì)胞(CHL)株V79。?

試驗(yàn)方法?

茶樣常規(guī)成分分析方法

茶葉水浸出物：全量法；茶多酚總量測定：酒石酸鐵比色法；咖啡堿含量：紫外分光光度法；茶葉水分含量的測定：恒重法。?

除此之外，還用了小白鼠急性毒性試驗(yàn)方法、小白鼠骨髓微核試驗(yàn)方法、小白鼠精子畸形試驗(yàn)方法、Ames 試驗(yàn)方法、倉鼠肺成纖維細(xì)胞(CHL)染色體畸變試驗(yàn)。?? ?

結(jié)果與分析?

茶樣常規(guī)成分分析結(jié)果(如表)?

化學(xué)分析法是食品毒理學(xué)評價(jià)的重要手段，普洱茶生化成分的分析研究已有較多的報(bào)道，本試驗(yàn)選檢以上幾個(gè)項(xiàng)目，以對所試茶樣的情況作簡要界定。檢測結(jié)果表明所選茶樣的常規(guī)成分具有較好的代表性。?

各茶樣小白鼠(KM)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

各茶樣的半致死劑量(LD50)的計(jì)算, 急性毒性試驗(yàn)中LD50的計(jì)算有多種方法，本試驗(yàn)采用Bliss法統(tǒng)計(jì)軟件對各茶樣的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其結(jié)果如下：

六個(gè)茶樣的急性毒性統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析(如表)

急性毒性試驗(yàn)是指動(dòng)物一日內(nèi)單次或多次(在24小時(shí)內(nèi)分2～3次給藥)給藥后，在7天或14天中，連續(xù)觀察動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況，從定性和定量兩方面進(jìn)行觀察毒性反應(yīng)的方法。從毒理學(xué)角度來看，任何物質(zhì)都有毒性，人或動(dòng)物攝入任何物質(zhì)達(dá)到一定劑量都可能致死。文獻(xiàn)報(bào)道[171]，大鼠口服蒸餾水LD50為469±51 mL Kg-1，從表6可以看出，五個(gè)普洱茶樣品的LD50分別為：9.7g/kg、11.2g/kg、12.2g/kg、11.8g/kg、12.4g/kg，烘青綠茶樣的LD50為7.5g/kg，表明普洱茶樣的急性毒性比烘青綠茶樣還低，并發(fā)現(xiàn)六個(gè)樣品的一次灌胃量在5g/kg體重以下時(shí)喂養(yǎng)觀察十四天沒有動(dòng)物死亡，低于1/2LD50的灌胃劑量灌胃后多數(shù)動(dòng)物表現(xiàn)出神經(jīng)興奮癥狀；隨著灌胃劑量加大，動(dòng)物在十分鐘后出現(xiàn)神經(jīng)抑制癥狀。五個(gè)普洱茶樣的急性致死時(shí)間只有一個(gè)高峰期，而烘青綠茶則有兩個(gè)死亡高峰期，分析認(rèn)為普洱茶引起動(dòng)物死亡以及由烘青綠茶引起的第一死亡高峰是由過高濃度的咖啡堿所致，而烘青綠茶樣D引起第二個(gè)動(dòng)物死亡高峰則可能與過高濃度的茶多酚有關(guān)；根據(jù)WHO1977年頒布的毒性標(biāo)準(zhǔn)，六個(gè)茶樣的 LD50均大于5000 mg/kg體重，可判定為實(shí)際無毒。